Os representantes deste grupo são anaeróbios facultativos, vivem muito bem com ou sem oxigênio. Porém, se o meio em que estiverem não fornecer oxigênio e tiver uma temperatura por volta de 37°C, o seu desenvolvimento será potencializado. E é exatamente isso que preocupa muitos pesquisadores: esse desenvolvimento otimizado por uma temperatura equivalente à do corpo humano. Os estafilococos que são patogênicos trazem muitos prejuízos, entre eles está a coagulação sanguínea. Mas podem formar abscessos, supurações e outras infecções que podem evoluir para uma septicemia. As mais importantes espécies são:
- Staphylococcus aureus
- Staphylococcus epidemidis
- Staphylococcus saprophyticus
São organismos fáceis de cultivar, pois não precisam de um alimento específico para isso, apenas que este alimento seja rico em nutrientes.
Outro ponto preocupante é que desde que foram descritas oficialmente, essas bactérias eram sensíveis aos antibióticos. Mas com o uso desmensurado pelas pessoas, seja pela cultura ou pela falta de conhecimento, o potencial real do medicamento foi “banalizado” pela maioria das bactérias que adquiriram resistência. Um exemplo clássico é o da penicilina: quando surgiu, a penicilina se tornou o principal (e para muitas pessoas o único) medicamento no combate das mais diversas mazelas. Foi então que esta substância logo se tornou coloquial e graças à este uso desmedido, as bactérias se tornaram resistentes. E como numa sequência lógica, outros medicamentos foram criados e com o tempo foram também ficando obsoletos. Cepas bacterianas resistentes são mais comuns e mais frequentes em hospitais, cerca de 99%. Já fora desse ambiente o índice é mais baixo, mas ainda preocupante: cerca de 60%.
É quase impossível se defender dos estafilococos, eles estão por toda parte e pela extensão do nosso corpo principalmente. Com isso, a transmissão pessoa-pessoa é inevitável, mas a higiene é necessária para tentar conter uma eventual proliferação agressiva e anormal dos estafilococos.
A intoxicação alimentar é um problema sério, especialmente a causada pela endotoxina estafilocócica termoestável. Ocorre através do consumo de alimentos lácteos (matriz e derivados do leite) contaminados. Mas outros alimentos que são ricos em nutrientes também são o habitat ideal para essas bactérias. A manipulação sem a higiene adequada das mãos é substancialmente um fator determinante para a dissipação dos estafilococos.
Bibliografia:
http://microbiologia.com.sapo.pt/staphylococcus.htm
http://www.portaleducacao.com.br/biologia/artigos/2272/staphylococcus
http://pt.wikipedia.org/wiki/Staphylococcus
http://www3.niaid.nih.gov/labs/aboutlabs/lhbp/pathogenMolecularGeneticsSection/
ISOLAMENTO E CARACTERIZAÇÃO DE ESTAFILOCOCOS
Objetivo: Demonstrar as características morfológicas e propriedades bioquímicas dos estafilococos
Princípio: Morfologicamente apresentam-se nos esfregaços corados pelo Gram em forma de “cachos de uva”, sendo esta uma característica peculiar que os diferenciam dos estreptococos.
Podem ser isoladas com relativa facilidade de coleções purulentas da nasofaringe, lesões de pele e aparelho genital.
Dentre as espécies de estafilococos, sem dúvida alguma o Staphylococcus aureus é potencialmente a espécie mais virulenta, onde, em ágar sangue, geralmente apresenta-se hemolítico.
São vários os métodos de diferenciação das espécies de estafilococos; entretanto, o teste da coagulase é o mais indicado e adequado para a caracterização do S. aureus, visto que somente esta espécie apresenta reação positiva, configurando portanto esta reação como prova da patogenicidade dos estafilococos.
As outras espécies de estafilococos, denominadas de coagulase-negativa, somente nas últimas décadas têm sido implicadas na etiologia de processos infecciosos. Entretanto, os métodos ordinários de identificação empregados na microbiologia são incapazes de detectar isoladamente as doze espécies coagulase-negativa, ficando restrito o diagnóstico presuntivo ás espécies S. epidermidis e S. saprophyticus.
Material: Placas de ágar-sangue, de Chapman-Stone e ágar DNAse, cultivadas S.aureus de um lado eS.epidermidis do outro lado; Lâmina de microscópio, bico de Bunsen, bateria de corante de Gram, tubinhos (120mm), 2 pipetas de 2ml, 2 tubos contendo 2ml de salina, água oxigenada a 3%, alça de platina, plasma de coelho, Solução de bromocresol, placa contendo ágar Mueller-Hinton, disco de novobiocina, ácido clorídrico 1N, pipeta Pasteur.
Método: Observar as placas com cultura bacteriana, anotar as características coloniais e realizar os seguintes testes:
- Coloração de Gram
- Prova da catalase:
- Prova da Coagulase:
- Fermentação do manitol:
- Tolerância ao NaCl
- Sensibilidade a novobiocina
Coloração de Gram
- Fazer esfregaços em lâminas e fixar pelo calor
- Cobrir a área do esfregaço com a solução de cristal-violeta por cerca de 1min.;
- Lavar com água corrente e escorrer o excesso de água;
- Cobrir a área do esfregaço com a solução de iodo durante cerca de 1 minuto;
- Descorar a lâmina com a mistura álcool-acetona, até que o solvente escorra incolor;
- Cobrir o esfregaço com a solução de safranina por cerca de 30 segundos;
- Lavar com água corrente;
- Deixar secar ao ar .
Os estafilococos são visualizados como cocos Gram-positivos (roxo) isolados e agrupados em forma de cachos de uva
Prova da Catalase
A catalase presente na maior parte das bactérias atua na reação:
2H2O2 catalase 2H2O + O2
Colocar em um tubinho (120mm) 1 ou 2 ml de água destilada, emulsionar quantidade suficiente de colônias de Staphylococcus aureus para obter uma suspensão espessa; acrescentar-lhe 3 gotas de água oxigenada a 3%. Não agitar. O desprendimento de bolhas de gás indica a presença de catalase.
Prova da coagulase:
Enzima que, reagindo com um co-fator existente no plasma de certas espécies (coelho, cavalo, humano), transforma o fibrinogênio em fibrina.
O co-fator plasmático é indistinguível da protrombina, porém a enzima se diferencia da tromboquinase pois, ao contrário desta última, não requer a presença de íons Ca+2, nem dos fatores 5, 6 e 7 para sua ativação.
Teste: Misturar 0,5ml de cultura em caldo simples ou de suspensão espessa de estafilococos a 0,25ml de sangue total ou plasma de coelho oxalatado a 0,2% ou citratado a 1%. Leitura após
Prova presuntiva em lâmina: Emulsionar homogeneamente uma alça do induto bacteriano em uma gota de salina. Misturar uma alça de plasma e agitar circularmente. Reação positiva: formação de grumos em 2 segundos. Reação negativa será controlada pelo teste em tubo.
Plasma de coelho 1/5 (para prova de coagulase)
Sol. de citrato de sódio a 3,8%.... 2,5ml Sangue de coelho........ 10,0ml
|
Separar o plasma (centrifugar a 2000 rpm durante 20min.), diluir a 1/5 em solução fisiológica. |
Fermentação do Manitol e Tolerância ao NaCl
Semear a bactéria no meio de Chapman-Stone (item 8.5.15). O meio fornece três respostas: a) pigmentação; b) fermentação da manita – adicionar 1 gota de sol. de bromocresol às áreas de onde se removeram colônias tipicamente pigmentada; c) produção de gelatinase – halo claro em torno das colônias
Sensibilidade à Novobiocina
Fazer uma suspensão da bactéria em salina estéril. Com swab estéril semear por espalhamento a bactéria sobre o meio de Mueller-Hinton. Colocar um disco de novobiocina no centro da placa. Incubar a 37ºC por
Desoxirribonuclease (DNAse)
“DNase Test Ágar” (Difco ou BBL) ... 42,0g Água destilada ................... 1000ml |
Fundir e esterilizar a
Inocular em pontos definidos, sem estriação. Após crescimento, revelar com solução de ácido Clorídrico 1N. Uma zona transparente em torno do crescimento, após opacificação do ácido nucléico residual pelo ácido clorídrico, indica um teste positivo.
Resultados:
- Em ágar sangue as colônias de estafilococos apresentam-se com coloração branca ou amarelada, opacas, cremosas e convexas, sendo que algumas cepas bacterianas produzem beta-hemólise.
- O primeiro passo para a identificação presuntiva das colônias de estafilococos consiste na confecção de um esfregaço e posterior coloração pelo método de Gram, onde este grupo bacteriano apresenta-se agrupado caracteristicamente na forma de .“cachos de uva”
- Quando não se consegue a diferenciação entre estafilococos e estreptococos, é recomendável a utilização da prova da catalase.
- A catalase não é produzida pelos estreptococos, e a prova, que pode ser realizada em lâmina ou em tubo, se positiva, caracteriza a presença dos estafilococos.
- Após a caracterização de uma colônia como sendo estafilococo, o passo seguinte consiste em identificar se esta é ou não S. aureus. Como relatado anteriormente, a prova da coagulase é utilizada pela maioria dos laboratórios para a identificação presuntiva desta espécie.
- As cepas bacterianas coagulase negativa identificadas pelos métodos ordinários, S. epidemidis e S. saprophyticus, têm sua diferenciação através da prova de sensibilidade à novobiocina sendo que a maior parte das cepas de S.saprophyticus é resistente a este antibiótico ao contrário do S. epidemidis que mostra-se sensível.
- A fermentação do manitol e a prova da desoxiribonuclease já foram muito utilizadas na diferenciação das espécies de estafilococos, entretanto sua utilização atual encontra-se limitada
22. Quais as estruturas na célula do estafilococos e quais as toxinas que protegem a bactéria da fagocitose?
RESP: cápsula e proteína A
23. Quais as enzimas estafilocócicas sugeridas como fatores de virulência? Coagulase,Catalase, Hialunoridade, Lípase, Nucleases, Penicilinase
24. Uma das características dos cocos piogênicos é produzirem enzimas e toxinas. Complete o quadro abaixo com exemplos de enzimas e toxinas dos Staphylococcus e Streptococcus
STAPHYLOCOCCUS |
STREPTOCOCCUS |
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Enzimas |
Toxinas |
Enzimas |
Toxinas |
Coagulase |
Esfoliativa |
Hemolisina |
Eritrogênica |
Hemolisina |
Endotoxina |
Protease |
Estreptoquinase |
Catalase |
Leucocidina |
Hialuronidase |
Dnase |
Hialuronidase |
TSST-1[1] |
Estreptolisinas |
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Estafiloquinase |
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Proteinase |
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Lipases |
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25. Quais as toxinas implicadas nas doenças estafilocócicas? RESP= toxinas esfoliantes, leucocidina, toxina da síndrome do choque tóxico, enterotoxina
26 Quais são os fatores predisponentes para a infecção por Staphylococcus ? RESP= Defeito quimiostáticos dos leucócitos, defeito na opsonização dos anticorpos, defeitos na destruição intracelular bacteriana, lesões cutâneas, presença de corpos estranhos
27. Um jovem de 18 anos de idade caiu sobre o joelho enquanto jogava basquetebol. O joelho ficou dolorido, porém não houve solução de continuidade da pele. No dia seguinte, o joelho estava inchado e permaneceu doloroso, de modo que ele foi levado ao Departamento de emergência local. Foi aspirado um líquido claro do joelho, e o médico prescreveu tratamento sintomático. Dois dias depois, a inchação voltou, a dor aumentou e ocorreu eritema no joelho. Como o paciente também se sentiu sistematicamente doente, com temperatura oral de 38,8ºC, retornou à sala de emergência. A aspiração do joelho revelou um líquido turvo e a cultura do líquido e hemocultura foram positiva para Staphylococcus aureus.
a) Citar duas fontes possível deste microrganismo na situação problema RESP= Bacteria da propria pele e bactéria do chão
b) Os estafilococos produzem uma variedade de doenças, incluindo a síndrome da pele escaldada estafilocócica, a síndrome do choque tóxico, intoxicação alimentar, infecções cutâneas e endocardite. De que maneira os sintomas clínicos destas doenças diferem da infecção observada neste paciente? RESP=A síndrome da pele escaldada estafilocócica é uma infecção cutânea disseminada na qual a pele descama como se tivesse sido queimada. Certos tipos de estafilococos produzem uma substância tóxica que faz com que a camada superior da pele (epiderme) se separe do resto da mesma. Algumas vezes, as infecções cutâneas causadas por Staphylococcus podem causar a síndrome do choque tóxico, uma condição potencialmente letal.s A síndrome da pele escaldada estafilocócica quase sempre afeta lactentes, crianças jovens e indivíduos com depressão do sistema imune.
c) Descreva como se procedeu a cultura para o isolamento e caracterização do germe da situação-problema
28. Qual a relação que existe entre o glicocálise e infecções por Staphylococcus epidermidis: RESP= A glicocálise é estrutura da parede celular e da cápsula que afeta a opsonização, inibe a quimiotaxia induz a degranulação.
29. Descreva o gênero Staphylococcus com suas características morfológicas, fisiológicas, bioquímica e genética RESP= morfológica: cocos isolados agrupados em cacho; Fisiológica: fisiologia não exigente nutricionalmente, cresce em meio simples a
30. Quais as principais provas funcionais que caracterizam os Staphylococcus e os Streptococcus. RESP= Staphylococcus:coagulase, catalase, tolerância ao NaCl, monitol, novobiocina; Streptococcus: hemólise, catalase, bile eucalina - bacitracina, opitocina
31. Qual o papel do Staphylococcus epidermidis em infecção associadas a próteses? Qual a propriedade de virulência que ajuda no estabelecimento destas infecções? RESP= Como bactéria faz parte da microbiota normal, coloniza mais facilmente as proteases devido principalmente sua alta capacidade de adesão a mesma.
32. Qual a infecção causada por Staphylococcus saprophyticus? Qual a população mais susceptível a esta infecção? RESP= Infecção hospitalar, infecção oportunista / + susceptível a infecção: pessoas imunodeprimidas, idosos e pacientes hospitalizados
33. Um estudante percebe que a amostra de Staphylococcus aureus usada no controle de qualidade e uma amostra de Escherichia coli crescem e produzem uma cor amarela no ágar manitol salino, meio este seletivo para estafilococos. O que o acadêmico pode concluir em relação à preparação do meio de cultura? RESP = O meio não contém cloreto de sódio a 10%, pois somente os Staphylococcus são tolerantes a NaCl.
34. Após a caracterização de uma colônia como sendo estafilococos, um estudante de Farmácia, observou reação positiva nos testes de coagulase, fermentação do manitol e DNAse, bem como resistência à novobiocina. Que conclusão pode tirar? Resp= Trata-se do Staphylococcus aureaus.
35. Faça comentários sobre a síndrome do choque-toxico RESP A síndrome do choque toxico e uma doença potencialmente fatal, causada por Staphylococcus aureus e uma forma de contaminação do sangue resultante da liberação de toxinas pelas bactérias. Pode ocorrer por ferimentos ou Infecções na garganta, pulmões, pele ou osso. Entretanto e mais comum acometer mulheres em idade fértil principalmente as mulheres que usam absorventes internos (Ob, Tampax, etc.) Estes podem alojar a bactéria e fornecer o meio ambiente para o seu desenvolvimento, principalmente quando o absorventes internos são deixados no local por tempo muito prolongado. Além disso, as fibras superabsorventes de alguns absorventes internos podem causar ferimentos microscópicos na vagina, que permitem transmissão da toxina bacteriana para o sangue. Apesar de não ser comum, a síndrome do choque toxico pode ocorrer após cirugias, incluindo mulheres que foram submetidas a parto cesáreo.
36. Faça comentários sobre as seguintes doenças: impetigo bulhoso, síndrome do choque tóxico, Síndrome da pele escaldada estafilocócica e Intoxicação alimentar estafilocócica. Resp=Impedigo bulhoso: causado por Staphylococcus Aureaus, que se desemvolvem na pele produzindo lesões com bolhas de gás; Síndrome da pele escaldada: caracteriza-se pelo deslocamento de extensas áreas da epiderme, o que ocorre quando a pele é banhada por água fervente; Intoxicação: Causada pela presença de endotoxina
37. As cepas bacterianas coagulase negativa identificadas pelos métodos ordinários, S. epidemidis e S. saprophyticus, têm sua diferenciação através da prova: Ä coagulase; Ä catalase; Ä Manitol; Ä tolerância ao NaCl; Ä Novobiocina
38. Faça comentários sobre Foliculite. RESP= A foliculite é uma inflamação dos folículos pilosos causada por uma infecção por Staphylococcus. Nos folículos pilosos, ocorre o acúmulo de uma pequena quantidade de pus, o que faz com que eles se tornem irritados e hiperemiados (avermelhados). A infecção danifica os pêlos, os quais podem ser facilmente arrancados. A foliculite tende a se tornar crônica nos locais em que eles se encontram profundamente enraizados na pele (p.ex., na área da barba). Os pelos rígidos podem encurvar e penetrar na pele, produzindo irritação mesmo sem uma infecção importante.
39. Faça comentários sobre FURUNCULOS. RESP=Os furúnculos são áreas grandes, elevadas, dolorosas e inflamadas causadas por uma infecção por Staphylococcus em torno dos folículos pilosos. Mais freqüentemente, os furúnculos ocorrem no pescoço, nas mamas, na face e nas nádegas e são particularmente dolorosos quando se formam em torno do nariz, das orelhas ou nos dedos. Geralmente, os furúnculos apresentam pus no centro. Geralmente, eles eliminam um exsudato esbranquiçado e discretamente sanguinolento. Alguns indivíduos apresentam furúnculos incômodos e recorrentes (furunculose) e, ocasionalmente, ocorrem epidemias de furúnculos entre adolescentes que vivem em bairros populosos e carecem de uma higiene adequada.
40. Que são carbúnculos? Os carbúnculos são aglomerados de furúnculos que produzem grandes úlceras cutâneas e a formação de cicatrizes. Os carbúnculos evoluem e curam mais lentamente que os furúnculos isolados e podem causar febre e fadiga por se tratar de uma infecção mais grave. Os carbúnculos ocorrem mais freqüentemente nos homens e mais comumente na região posterior do pescoço. Os indivíduos idosos, os diabéticos e aqueles com doenças graves apresentam uma maior tendência a apresentar carbúnculos.
41. Após a caracterização de uma colônia como sendo estafilococo, o passo seguinte consiste em identificar se esta é ou não S. aureus. A prova bioquímica utilizada pela maioria dos laboratórios para a identificação presuntiva desta espécie é: Ä coagulase; Ä catalase; Ä Manitol; Ä tolerância ao NaCl; Ä Novobiocina
42. São provas funcionais para caracterização dos estafilococos: a) Prova da catalase; b) Prova da Coagulase; c) Fermentação do manitol; d) Tolerância ao NaCl; e) Sensibilidade a novobiocina f) Todas estão corretas